A101D細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

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產(chǎn)品名稱：A101D細(xì)胞

中文名稱：人乳腺癌細(xì)胞

種屬：人

來源：乳腺導(dǎo)管癌；女性

培養(yǎng)條件：EMEM/1640

生長狀態(tài)：貼壁

A101D細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

其他細(xì)胞培養(yǎng)用液

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，除了培養(yǎng)基外，還經(jīng)常用到一些平衡鹽溶液、消化液、pH調(diào)整液等。

一、平衡鹽溶液（balanced  salt  solution,BSS）：主要是由無機鹽、葡萄糖組成，它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。主要用于取材時組織塊的漂洗、細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。zui簡單的BSS是Ringer。D-Hank's與Hank's的一個主要區(qū)別是前者不含有Ca2+、Mg2+，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。Earle平衡液含有較高的NaHCO3(2.2g/L),適合于5%CO2  的培養(yǎng)條件，Hank's平衡液僅含有0.35g/L  NaHCO3，不能用于5%CO2的環(huán)境，若放入CO2培養(yǎng)相，溶液將迅速變酸，使用時應(yīng)注意。

配制溶液應(yīng)使用雙蒸水或去離子水。如果配方中含有Ca2+、Mg2+，應(yīng)當(dāng)首先溶解這些成分。配好的平衡鹽溶液可以過濾除菌或高溫滅菌。

A101D細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

EVSA-T                                           人乳腺癌細(xì)胞         人     乳腺癌；腹水轉(zhuǎn)移；女性     DMEM     貼壁

BT-483                                           人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞         人     乳腺導(dǎo)管癌；女性         DMEM     貼壁

MDA-MB-435                              人乳腺癌細(xì)胞         人     乳腺癌     DMEM     貼壁

MDA-MB-157                              人乳腺癌細(xì)胞         人     乳腺癌；胸腔積液轉(zhuǎn)移；女性     L15   貼壁

SW1417                                         人結(jié)腸癌細(xì)胞         人     結(jié)腸癌；女性         L15   貼壁

MH-S                                              小鼠肺泡巨噬細(xì)胞         小鼠         巨噬細(xì)胞；雄性；SV40轉(zhuǎn)化；BALB/cJ       1640         懸浮

L2                                                    大鼠肺泡上皮細(xì)胞         大鼠         肺泡；上皮細(xì)胞     DMEM     貼壁

KBM7                                             人慢性髓白血病細(xì)胞細(xì)胞     人     慢性髓原白血病；男性         IMDM      懸浮

SUM149PT                                   人乳腺癌細(xì)胞         人     乳腺癌；女性         DMEM     貼壁

FL83B                                             小鼠正常肝細(xì)胞     小鼠         肝；自發(fā)永生；C57BL/6J      DMEM     貼壁

PL45                                               人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞         人     胰腺導(dǎo)管癌；男性         DMEM     貼壁

MPC5                                             小鼠腎足細(xì)胞         小鼠         腎足細(xì)胞；SV40轉(zhuǎn)化    DMEM     貼壁

HUVSMC                                       人臍靜脈平滑肌細(xì)胞     人     臍靜脈平滑肌         DMEM     貼壁

Htori-3                                           人正常甲狀腺細(xì)胞         人     甲狀腺；SV40轉(zhuǎn)化；女性    F12K          貼壁

TPC1                                              人甲狀腺癌細(xì)胞     人     甲狀腺乳頭狀癌；女性         L15   貼壁

C28/I2                                            人正常軟骨細(xì)胞     人     軟骨；SV40轉(zhuǎn)化；女性        DMEM     貼壁

hADSCs                                         人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞     人     脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞         DMEM     貼壁

M059K                                           人膠質(zhì)瘤細(xì)胞         人     膠質(zhì)瘤；男性         EMEM      貼壁

C1498                                            小鼠白血病細(xì)胞     小鼠         白血病；雌性；C57BL/6J      DMEM     懸浮

SNU878                                         人肝癌細(xì)胞     人     肝癌；女性     1640         貼壁

SNU886                                         人肝癌細(xì)胞     人     肝癌；男性     1640         貼壁

NCI-H1417                                   人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞         人     小細(xì)胞肺癌；女性         1640         貼壁

HNSC                                             人神經(jīng)干細(xì)胞         人     神經(jīng)干細(xì)胞     DMEM     貼壁

2BS                                                 人胚肺成纖維細(xì)胞         人     胚肺；成纖維細(xì)胞；女性     DMEM     貼壁

HIBEpiC                                         人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞     人     肝內(nèi)膽管；上皮細(xì)胞     1640         貼壁

hUC-MSC                                      人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞     人     臍帶；間充質(zhì)干細(xì)胞     DMEM     貼壁

MBT-2                                            小鼠膀胱癌細(xì)胞     小鼠         膀胱移行細(xì)胞癌；C3H/He    1640         貼壁

32DClone3                                   小鼠骨髓淋巴母細(xì)胞     小鼠         骨髓淋巴瘤；C3H/HeJ  DMEM     貼壁

A-72                                               犬癌細(xì)胞         犬     癌細(xì)胞；金毛獵犬         1640         貼壁

MIHA                                             正常人肝細(xì)胞         人     肝     1640         貼壁

IR983F                                           大鼠骨髓瘤細(xì)胞     大鼠         骨髓瘤     IMDM      懸浮

SF9                                                  昆蟲卵巢細(xì)胞         昆蟲         卵巢；自發(fā)永生；雌性         Grace's Ins       懸浮+貼壁

Ishikawa                                       人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞         人     內(nèi)膜腺癌；女性     1640         貼壁

HCEC                                             人角膜上皮細(xì)胞     人     角膜；上皮細(xì)胞     1640         貼壁

HCC1500                                      人乳腺管癌細(xì)胞     人     乳腺管癌；女性     DMEM     貼壁

Th17                                               小鼠輔助性T細(xì)胞          小鼠         輔助性T細(xì)胞          1640         懸浮

消化液：取材進行原代培養(yǎng)時常常需要將組織塊消化解離形成細(xì)胞懸液，傳代培養(yǎng)時也需要將貼壁細(xì)胞從瓶壁上消化下來，常用的消化液有胰酶（Trypsin）溶液和EDTA溶液，有時也用膠原酶（collagenase）溶液。

1、胰酶溶液：胰酶活性可用消化酪蛋白的能力表示，常見有1：125和1：250，即一份胰酶可消化125或250份酪蛋白。組織培養(yǎng)用胰酶溶液一般配制成0.1-0.25%濃度，配制時要用不含Ca2+    、Mg2+及血清的平衡鹽溶液（如前面的D-Hank's），因為這些物質(zhì)會對胰酶產(chǎn)生抑制作用。胰酶作用及溶解的*pH是8-9，配制胰酶溶液應(yīng)將液體調(diào)至pH8左右，充分溶解，過濾除菌。過濾后可以再調(diào)只pH7.5，也可不調(diào)。

使用細(xì)胞清洗液配制胰酶消化液：含0.5%胰酶的細(xì)胞清洗液（100ml細(xì)胞清洗液加0.5g胰酶），過濾除菌，分裝于4度保存。

2、EDTA溶液：EDTA溶液也常用來解離細(xì)胞，它的作用機制是破壞細(xì)胞間的連接。對于一些貼壁特別牢固的細(xì)胞，還可以用EDTA和胰酶的混合液進行消化。EDTA溶液的使用濃度為0.02%，配制時應(yīng)加堿助溶，配制后可過濾除菌，也可高溫消毒滅菌。

3、膠原酶溶液：膠原酶在上皮類細(xì)胞原代培養(yǎng)時經(jīng)常使用，膠原酶作用的對象是膠原組織，因此不容易對細(xì)胞產(chǎn)生損傷。膠原酶的使用濃度為0.1-0.3mg/L或200000U/L,作用的*pH為6.5。膠原酶不受Ca2+ 、Mg2+及血清的抑制，配制時可用PBS。

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