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抗生素在細(xì)胞培養(yǎng)中應(yīng)該怎么用?

發(fā)布時(shí)間:2020-04-28瀏覽:1963次
   細(xì)胞培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境(無(wú)萄、適宜溫度、酸堿度和一定營(yíng)養(yǎng)條件等),使之生存、生長(zhǎng)、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的-種方法。不論對(duì)于整個(gè)生物工程技術(shù),還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō),細(xì)胞培養(yǎng)都是-個(gè)*的過(guò)程,其本身就是細(xì)胞的大規(guī)??寺?。該技術(shù)可以由一一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)大量培養(yǎng)成為簡(jiǎn)單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞,這是克隆技術(shù)*的環(huán)節(jié)。

  細(xì)胞培養(yǎng)起來(lái)感覺(jué)會(huì)很簡(jiǎn)單,但是有時(shí)候也會(huì)出現(xiàn)各種不順的問(wèn)題 ,例如:污染,生長(zhǎng)緩慢,變形,死亡率過(guò)高…..,畢竟細(xì)胞是體外培養(yǎng)的,在培養(yǎng)的時(shí)候會(huì)受到各種外界因素的影響,培養(yǎng)基、血清、孵育溫度、C02濃度等,除此之外還有抗生素……

  一般來(lái)說(shuō)細(xì)胞培養(yǎng)是不需要加抗生素,因?yàn)榕囵B(yǎng)過(guò)程必須要無(wú)菌操作。如果實(shí)驗(yàn)室污染嚴(yán)重,建議*打掃一下,擦拭消毒、熏蒸或者紫外照射殺菌。然后把細(xì)胞實(shí)驗(yàn)涉及到的試劑都做下空培,包括使用的胰酶,胎牛血清等。如果實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌條件優(yōu)異,細(xì)胞培養(yǎng)可以不加抗生素,因?yàn)榭股氐乃幮胶投拘运椒浅=咏L貏e是用于細(xì)胞治療的培養(yǎng)。

  若當(dāng)心細(xì)胞感染,可以適當(dāng)添加一些抗生素預(yù)防,如果已經(jīng)有污染,建議按照以下方案添加:

  1、常用的是青霉素、鏈霉素聯(lián)合抑制細(xì)菌,即所謂的“雙抗”,主要針對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、陰性菌;對(duì)于細(xì)菌的感染也可用慶大或卡那霉素;

  2、如果真菌污染嚴(yán)重,可用兩性霉素/制霉菌素控制;

  3、若為支原體污染, 可以用sciencell的支原體抑制劑。在培養(yǎng)基中加入新鮮的支原體抑制劑溶液,每3-4天更換一次。一兩周內(nèi)的足以消除污染??梢杂行У目梢圆闅⒏鞣N原因感染的支原體。

  抗生素多加對(duì)細(xì)胞無(wú)益。加抗生素的主要問(wèn)題是操作不慎造成的污染未必能及時(shí)發(fā)現(xiàn),造成后期較大的損失。

  青鏈霉素是廣譜抑菌劑,對(duì)革蘭氏陰性和陽(yáng)性細(xì)菌有抗菌性,青霉素影響細(xì)菌細(xì)胞壁合成的終末步驟,在轉(zhuǎn)肽反應(yīng)步驟一直多肽鏈的延伸;鏈霉素與核糖體的30S亞基單位結(jié)合,阻斷細(xì)菌蛋白質(zhì)的組成。比較常用 。

  一旦細(xì)胞污染,處理辦法扔掉,查找原因,全面預(yù)防。如果細(xì)胞是經(jīng)過(guò)大量工作或高價(jià)才得到的,扔掉實(shí)在可惜,可以針對(duì)污染源加抗生素。也可以不加抗生素進(jìn)行單克隆有限稀釋至96孔板,再克隆化。

  但是污染帶來(lái)的實(shí)驗(yàn)影響和損失不可估量,主要的是平常都要做好細(xì)胞房的管理和消毒工作。防止污染的發(fā)生。

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