庫(kù)存現(xiàn)貨，全國(guó)各地均可發(fā)貨，全國(guó)統(tǒng)一*格，慧穎細(xì)胞庫(kù)出售品質(zhì)的B16-F0細(xì)胞，小鼠黑色素瘤細(xì)胞，報(bào)價(jià)/說(shuō)明書 詳細(xì)說(shuō)明如下：

產(chǎn)品名稱：B16-F0細(xì)胞

中文名稱：小鼠黑色素瘤細(xì)胞

細(xì)胞來(lái)源：小鼠皮膚

細(xì)胞簡(jiǎn)介：  B16-F0細(xì)胞為小鼠黑色素瘤細(xì)胞，來(lái)源于小鼠皮膚，中文名為小鼠黑色素瘤細(xì)胞，正常的細(xì)胞形態(tài)為上皮樣，貼壁生長(zhǎng)。

培養(yǎng)基：DMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10%

培養(yǎng)條件：37℃ 5% CO2

消化條件：0.25% (w/v) Trypsin-0.53 mM EDTA溶液，消化3-5min

傳化比例：1：4-1：10

換液時(shí)間：2-3天換液一次

凍存液比例：85%培養(yǎng)基，10%FBS, 5% (v/v) DMSO

凍存密度：1-3 ×10^6/管，液氮保存

庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨

細(xì)胞純度：94％

細(xì)胞活力：90％（ViabilitybyTrypanBlueExclusion）

細(xì)胞檢測(cè)：細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

慧穎生物出售高品質(zhì)，傳代次數(shù)少，細(xì)胞飽滿，光澤度好，來(lái)源背景清晰，售后跟蹤及時(shí)到位，*的B16-F0細(xì)胞，小鼠黑色素瘤細(xì)胞，報(bào)價(jià)/說(shuō)明書 @慧穎細(xì)胞庫(kù)出售400多種類細(xì)胞株細(xì)胞系，20多株耐藥株，細(xì)胞來(lái)源：中科院、美國(guó)ATCC、復(fù)旦大學(xué)、交通大學(xué)、DSMZ、UKNCC、BCRC、日本東京大學(xué)、日本IKA中心等。一對(duì)一服務(wù)，隨時(shí)解決細(xì)胞培養(yǎng)中疑難問題，跟蹤及時(shí)到位，幫您一起完成報(bào)告。

傳代細(xì)胞培養(yǎng)步驟：1．人無(wú)菌室之前用肥皂洗手，用75％酒精擦拭消毒雙手。2．倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，確定細(xì)胞是否需要傳代及細(xì)胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液置37℃下預(yù)熱。 3．超凈臺(tái)臺(tái)面應(yīng)整潔，用0.1％新潔爾滅溶液擦凈。 4．打開超凈臺(tái)的紫外燈照射臺(tái)面20 min左右，關(guān)閉超凈臺(tái)的紫外燈，打開抽風(fēng)機(jī)清潔空氣，除去臭氧。5．點(diǎn)燃酒精燈；取出無(wú)菌試管，巴士德吸管和刻度吸管；安上橡皮頭；過酒精燈火焰略燒后插在無(wú)菌試管內(nèi)。 6．將培養(yǎng)用液瓶口用75％酒精消毒，過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。7．倒掉培養(yǎng)細(xì)胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用2—3 mL Hanks液洗去殘留的舊培養(yǎng)基，或用少量胰酶涮洗一下。8．每個(gè)大培養(yǎng)瓶加入1 mL胰酶，小瓶用量酌減，蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞收回突起變圓時(shí)立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉。注意勿使細(xì)胞提早脫落入消化液中。9．加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基，反復(fù)吹打消化好的細(xì)胞使其脫壁并分散，再根據(jù)分傳瓶數(shù)補(bǔ)加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(7～10 mL／大瓶，3～5 mL／小瓶)制成細(xì)胞懸液，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋上瓶蓋，適度擰緊后再稍回轉(zhuǎn)，以利于CO2氣體的進(jìn)入，將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱。 10．對(duì)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，步驟7-9不做。可將細(xì)胞懸液進(jìn)行離心去除舊培養(yǎng)基上清，加入新鮮培養(yǎng)基，然后分裝到各瓶中。

Ana-1 細(xì)胞價(jià)格 小鼠巨噬細(xì)胞

AGS 細(xì)胞價(jià)格 人胃腺癌細(xì)胞

AE-2細(xì)胞價(jià)格 小鼠雜交瘤細(xì)胞抗AChE

AE-1細(xì)胞價(jià)格 小鼠雜交瘤細(xì)胞抗AChE

Acc-3 細(xì)胞價(jià)格 人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞

Acc-2 細(xì)胞價(jià)格 人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞

AAV-293 細(xì)胞價(jià)格 人胚腎細(xì)胞

A9 細(xì)胞價(jià)格 小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞

BEL-7402 細(xì)胞價(jià)格 人肝癌細(xì)胞

Bcap-37 細(xì)胞價(jià)格 人乳腺癌細(xì)胞

BALB3T3 clone A31 細(xì)胞價(jià)格 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

B95-8 細(xì)胞價(jià)格 絨猴EBV 轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞

B16 細(xì)胞價(jià)格 小鼠黑色素瘤細(xì)胞

AsPC-1 細(xì)胞價(jià)格 人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞

AR42J 細(xì)胞價(jià)格 大鼠胰腺外分泌細(xì)胞

品牌：Hyclone 貨號(hào)：SV30087.01（南美普通胎牛血清）100ml

品牌：Hyclone 貨號(hào)：SV30087.02（南美普通胎牛血清）500ml

品牌：Hyclone 貨號(hào)：SH30084.03（澳洲來(lái)源胎牛血清）500ml

品牌：Hyclone 貨號(hào)：SH30070.03（無(wú)紅色標(biāo)簽）（北美特級(jí)胎牛血清）500ml

品牌：Hyclone 貨號(hào)：SH30070.03E（帶紅色標(biāo)簽）（北美特級(jí)胎牛血清）500ml

品牌：Hyclone 貨號(hào)：SH30396.03（加拿大來(lái)源胎牛血清）500ml

品牌：Hyclone 貨號(hào)：SH30406.01（新西蘭來(lái)源胎牛血清）100ml

品牌：Hyclone 貨號(hào)：SH30406.02（新西蘭來(lái)源胎牛血清）500ml

品牌：Hyclone 貨號(hào)：SH30068.03（Hyclone活性炭處理胎牛血清） 500ml

品牌：Gibco 貨號(hào)：16000-044（北美來(lái)源胎牛血清）500ml

品牌：Gibco 貨號(hào)：10099-141（澳洲來(lái)源胎牛血清）500ml

品牌：Gibco 貨號(hào)：貨號(hào)：C2027050 （南美烏拉圭來(lái)源胎牛血清）500ml

品牌：Gibco 貨號(hào)：16250-078（美國(guó)來(lái)源超低IgG胎牛血清）500ml

品牌：Gibco 貨號(hào)：10270-106（南美源胎牛血清）500ml

品牌：Gibco 16141-079 胚胎干細(xì)胞胎牛血清 500ml

品牌：Gibco 10437-028（墨西哥來(lái)源胎牛血清）500ml

品牌：GIBCO 貨號(hào)：26400-044 （GIBCO透析型胎牛血清）500ml

品牌：GIBCO 貨號(hào)：16141-079 （GIBCO干細(xì)胞胎牛血清） 500ml

品牌：GIBCO 貨號(hào)：16140-071 （GIBCO滅活過胎牛血清） 500ml

品牌：GIBCO 貨號(hào)：10439-024 （GIBCO胚胎干細(xì)胞胎牛血清） 500ml

品牌：PAA 貨號(hào)：A15-101 奧地利PAA 普通胎牛血清 500ml

品牌：PAA 貨號(hào)：A15-151 奧地利PAA 優(yōu)級(jí)胎牛血清 500ml

品牌：SIGMA 貨號(hào)：F2442 北美源 優(yōu)等胎牛血清 500 ml

品牌：BOVOGEN 貨號(hào)：SFBS 南美源 普通胎牛血清 500 ml

品牌：BOVOGEN 貨號(hào)：SFBS 澳洲源 優(yōu)等胎牛血清 500 ml

品牌：SERANA 貨號(hào)：S-FBS-SA-011 南美源 普通胎牛血清 100 ml

品牌：SERANA 貨號(hào)：S-FBS-SA-015 南美源 普通胎牛血清 500 ml

品牌：SERANA 貨號(hào)：S-FBS-US-011 北美源 特級(jí)胎牛血清 100 ml 胚胎干細(xì)胞

B16-F0細(xì)胞，小鼠黑色素瘤細(xì)胞，報(bào)價(jià)/說(shuō)明書 的培養(yǎng)

【初代培養(yǎng)原理】

將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖，這一過程稱原代培養(yǎng)。

儀器：培養(yǎng)箱（調(diào)整至37℃），培養(yǎng)瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、手術(shù)器械、血球計(jì)數(shù)板、離心機(jī)、水浴箱（37℃）

材料：動(dòng)物組織塊

試劑：1640培養(yǎng)基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒

【初代消化培養(yǎng)法】

（1）準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

（2）布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

（3）處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60分鐘。

（4）剪切：用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊，以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角燒瓶中，結(jié)扎瓶口或塞以膠塞。

（5）消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨谩Ｏ瘯r(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

（6）分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500~1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

（7）計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，pH要求在7.2~7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說(shuō)明液體變酸，可用NaHCO23調(diào)整。

（8）培養(yǎng)：置于36.5℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需要換新塞。

【初代組織塊培養(yǎng)法】

《1》剪切：把組織小塊置于小燒杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸靜Hanks液，用眼科剪反復(fù)剪切1mm3塊為止。

《2》擺布：用彎頭吸管吸取若干小塊，置于培養(yǎng)瓶中，用吸管彎頭把組織小塊擺布在培養(yǎng)瓶底部，小塊相互距離以0.5cm為宜，每一25ml培養(yǎng)瓶底可擺布20~30塊。

《3》輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，另瓶底向上，注意翻瓶時(shí)勿另組織小塊流動(dòng)，塞好瓶塞，置36.5℃溫箱培養(yǎng)2小時(shí)左右（勿超過4小時(shí)），使小塊微干涸。

《培養(yǎng)》從微箱中取出培養(yǎng)瓶，開塞，46度斜持培養(yǎng)瓶，箱瓶底腳部輕輕注入培養(yǎng)液少許，然后緩緩再把培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)過來(lái)，讓培養(yǎng)液慢慢覆蓋附于瓶地上的組織小塊。置溫箱中靜止培養(yǎng)。待細(xì)胞從組織塊游出數(shù)量增多后。再補(bǔ)加培養(yǎng)液。

【傳代培養(yǎng)法原理】

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng)，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。 傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

【材料和試劑】

1）細(xì)胞：貼壁細(xì)胞株

2）試劑：0.25％胰酶、DMEM 90%,德國(guó)SERANA胎牛血清 Fetal Bovine Serum 10%

3）儀器和器材：倒置顯微鏡，培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等

【操作步驟】

1）吸除培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。

2）向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許，以能覆滿瓶底為限。

3）置溫箱中2~5分鐘，當(dāng)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大后，立即終止消化。

4）吸除消化液，向瓶?jī)?nèi)注入Hanks液數(shù)毫升，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘余消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細(xì)胞時(shí)，動(dòng)作要輕，以免把已松動(dòng)的細(xì)胞沖掉流失，如用胰蛋白酶液?jiǎn)为?dú)消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液沖洗，直接加入培養(yǎng)液。

5）用吸管吸取營(yíng)養(yǎng)液輕輕反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。

6）計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，把細(xì)胞懸液分成等份分裝入數(shù)個(gè)培養(yǎng)瓶中，置溫箱中培養(yǎng)。

hFOB1.19人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞株

HaCaT人永生化表皮細(xì)胞株

A431人皮膚鱗癌細(xì)胞株

CNE人鼻咽癌細(xì)胞株

MG69人骨肉瘤細(xì)胞株

注意：換液時(shí)一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)不好。